組織樣本處理：1.稱取5~20 mg新鮮或-80℃凍存的組織，在研缽中加入液氮充分研磨成粉末狀。2.將研磨好的粉末迅速轉移到預先裝有500 μL裂解液1、80 μL核酸保護劑6和20 μL蛋白酶K的離心管中，震蕩混勻15~30s，在室溫下放置10 min孵育。注：如使用組織研磨儀鋼珠研磨，可在研磨后將500 μL裂解液、80 μL核酸保護劑和20 μL蛋白酶K加入到研磨管中。 3.孵育后，12,000 rpm (～13，400×g)離心5 min，轉移500 μL上清至96孔樣品板中。血清樣本處理：1.在不解凍的情況下，在裝有250 μL血清的離心管中加入250 μL裂解液、80 μL核酸保護劑和20 μL蛋白酶K，震蕩混勻15~30 s，在室溫下放置10 min孵育。注：不要在沒有試劑的情況下解凍血清樣本，這將導致RNA降解2.轉移500 μL上清至96孔樣品板中。新鮮全血樣本處理1.取新鮮抗凝血，加入6~10倍體積的紅細胞裂解液。2.在冰上孵育5~10 min。在孵育過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。注：對于鼠的血液，裂解5 min即可，對于人的外周血，裂解應延長到10 min。注：在孵育的過程中溶液將變成半透明狀態(tài)，表明紅細胞裂解。如果必要的話，孵育時間可延長至20 min。3.4℃條件下2,100 rpm(~400×g)離心10 min，將上清去除。注：如發(fā)現(xiàn)紅細胞沒有裂解完畢，可以重復步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。4.向白細胞沉淀中加入2倍紅細胞裂解液，重懸細胞。5.4℃條件下2,100rpm離心10 min，將上清去除。6.向白細胞沉淀中加入裂解液1，具體加量按照下表進行，渦旋或使用移液器混勻。注：如果血液不是健康人血，需要根據血液中白細胞的數量來確定所需裂解液1的體積，此時細胞應裂解，塊狀細胞沉淀消失。裂解液1 全血（mL） 白細胞數量300 多至0.5 多至2×106600 0.5~1.5 2×106至1×1077.轉移300 μL上清至96孔樣品板中。